共振扫描器是一种检流镜扫描器,可以通过单点扫描显微镜(真正的共聚焦和多光子激光扫描)快速采集图像。跟踪快速过程(特别是活体样品)需要很高的采集速度。它具有提供更好的荧光信号和减少光漂白的额外好处
由于共振扫描器仅在规定的频率下振荡,因此它缺乏位置和速度控制,但却提供了最高的图像采集速度。徕卡扫描显微镜目前使用频率高达12,000 Hz的扫描器(2019年1月)。在双向扫描中,这转换为每秒24,000行。具有512行的帧只需要大约20毫秒的记录时间。
共振时,扫描器只能像钟摆或孩子的秋千那样以正弦形式工作。因此,像素时钟必须与扫描器的运动具有非线性同步。一个智能控件(图1)可以适应扫描器的振幅和相位。这种适应性允许以可自由调整的扫描分辨率扫描整个视场[FOV];也就是说,每行像素可以设置为任何整数,最大为2496。
图1:用于谐振扫描器的像素时钟发生器的示意图,该时钟扫描器采用用于位置读出的辅助激光二极管和位置敏感设备,该设备传送可以再现扫描镜全部运动的信号。利用该扫描系统,照明点的位置始终是已知的,并且所检测到的荧光信号可以适当地分布在等距的像素(像素)之间。此概念允许自由调整缩放系数,并且不限制帧大小设置。
徕卡共振扫描器采用三反射镜概念,与传统的两反射镜扫描器相比,在照明方面具有出色的均匀性。树镜像概念被称为“ x2y扫描器”。这种方法解决了具有两个反射镜的扫描器系统的普遍问题,这两个反射镜无法在没有附加中继光学器件的情况下同时放置在正确的位置(后焦平面)。通常,通过牺牲照明的均匀性来接受偏差(对亮度和分辨率的均匀性具有负面影响)。单个反射镜解决方案(万向支架/万向支架)提供均匀的照明,但仅限于极低的扫描速度。
x2y扫描器均匀地照亮整个FOV,并允许在y和x方向上都具有较高的扫描速度。
图1:动画示意图,说明了x2y扫描器概念的原理。x2y设计确保始终正确地填充物镜的入射光瞳,并且仍然允许高扫描速度。
共振扫描器设备由两个y扫描镜(标准非共振)和x方向的共振振镜组成。这种组合允许以很高的线频率进行扫描,每秒高达24,000条线(在双向模式下),而不会影响均匀性。两个低惯性振镜的y移动足够快,可以跟上高线频,并最终导致高帧频。研究活生物样品中时间分辨的快速过程需要高帧频。