有时可以使用偏斜照明来代替Becke线测试,以确定样品的折射率是高于还是低于周围介质的折射率。本互动程序探讨了当利用偏斜照明技术时,样品及其周围介质的折射率变化如何改变显微镜的可见性。
本程序以折射率为1.15的标本初始化,该标本位于折射率为1.33的周围介质(代表水或轻度缓冲的盐水溶液)中,并用源自图左下方的离轴光线照射程序窗口。为了操作本程序,请在1.0和1.5的值之间转换“标本”(折射率值)滑块。当滑块从右移到左时,目镜视图窗口中的样品外观会发生变化。要更改周围介质的折射率,请向右或向左移动“环绕声”(折射率值)滑块(此滑块的折射率范围也在1.0到1.5之间)。翻译环绕滑块也会影响样品的外观和可见性,如下所述。这两个滑块是交互的,一个滑块的位置会影响另一个滑块的运动范围。
在将标本安装在较低折射率的介质中的情况下,由轴向照明产生的阴影将出现在与光进入标本相反的一侧,反之亦然,如图1所示。如图1所示,图中描绘了两条相等大小的偏斜光线,它们以相同的入射角通过周围介质进入样品。在左图的点A处,光比在点B处散布在样本的更大区域上,因此样本上A点附近的区域显得比B点附近的区域暗。在这些条件下,当通过显微镜目镜观察时,样品的一侧会比另一侧阴影或暗一些(由图1左上方的点A'和B'表示)。当样品的折射率高于周围介质的折射率时就是这种情况。
当样品的折射率低于周围介质的折射率时,会产生相反的效果(请参见图1的右侧)。在这种情况下,标本的阴影或较暗的一面将位于靠近偏斜的光扇挡块的那一侧。当样品和周围介质具有相同的折射率时,则样品将是透明的(或不可见的),并且对偏斜照明不会有折射作用。
这种折射率确定技术的灵敏度高度取决于聚光镜焦距,视场光阑位置和扇形光阑的几何形状(如果使用)。通常,将聚光镜仔细聚焦并获得均匀的照明场可获得结果。