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奥林巴斯显微镜差分干涉(DIC)的组合方法


2017/4/1 9:37:21 发布者:admin


为了最小化光漂白的效果,荧光显微镜可以与对荧光染料无损的其他技术结合,如微分干涉(DIC),霍夫曼调制对比(HMC),透射暗场和相差。

荧光和DIC

该想法是使用非破坏性对比度增强技术在样本中定位特定的感兴趣区域,然后在不重新定位样本的情况下将显微镜切换到荧光模式。这种类型的典型实验的结果示于图1中。图1(a)示出了使用差分干涉对比成像的大鼠视网膜光神经节组织薄片。图1(b)中的显微照片显示了相同的视场,但是这次使用荧光照明(水银灯和奥林巴斯WU滤镜激发块)成像,细胞被荧光染料快蓝染色,重氮盐特异性地染色磷脂中的磷脂髓鞘。图1(c)示出了组合使用的两种技术,以产生叠加在视网膜的微分干涉对比图像上的荧光染色的视神经节脂质组织的美丽的显微照片。该图像用专门的萤石物镜记录,目的是允许同时观察荧光和差异干涉对比度的同一目的。

DIC和荧光的光路图

通常用于使用微分干涉对比(DIC)和荧光照明来同时成像样本的显微镜配置如图2所示.DIC使用位于连接到显微镜基座的灯塔中的卤钨灯提供的透射光进行。穿过场隔膜的光被反射镜反射到分层聚光镜中并通过位于聚光镜前焦平面处的Wollaston棱镜。

首先通过样品衍射的光穿过位于物镜后焦平面附近的第二个Wollaston棱镜,然后在穿过样本的光线不透明的中间像平面干涉。同时,由汞燃烧器发出的紫外线通过激发器和过滤器,然后由二向色镜从上方反射到样品上。由附着在染色标本上的发色团发出的二次荧光被物镜捕获,并通过屏障滤光片并进入目镜和/或观察筒。该配置可用于单独或组合使用技术(荧光和微分干涉对比度)对标本进行成像。

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