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德国莱茵伯格照明（一种光学染色）最初由英国显微镜学家朱利叶斯·莱茵伯格（Julius Rheinberg）在皇家显微镜学会（Royal Microscopical Society）和Quekett Club（英格兰）一千年前证明。这种技术是使用彩色明胶或玻璃过滤器的低至中等功率暗场照明的显着变化，以为样品和背景提供丰富的色彩。
莱茵伯格技术可以与更熟悉的暗场照明进行比较。在暗视野显微镜中，分层聚光镜布置成使来自灯泡的光线通过聚光镜，只能以非常倾斜的角度通过样品。穿过聚光镜的圆锥体的中心区域通过不透明的止动件而被阻塞，其直径足够大，以防止光直接进入显微镜物镜。在更复杂的暗场聚光镜 - 抛物面，心形，卡塞格林或Leuchtbild中 - 直接光的遮挡和斜射线的使用只能通过使用专门设计的镜面实现。
在暗场照明中，选择物镜的数值孔径（或通过物镜光圈或漏斗停止），使得聚光镜的光线不能直接进入物镜。进入物镜的唯一光线是当来自聚光镜的斜射线“撞击”样品时被样品的光反射，折射或衍射。样品然后在黑色的场上显得很亮; 因此名字暗场照明。黑色领域中明亮对象的鲜明对比增强了已解析细节的可视性。当绿色中心滤光片被不透明光阑替代时，可以用图1中的图示近似暗场聚光器，并且去除红色倾斜照明滤光片，允许未滤光的白光通过。
在与暗场有关的莱茵伯格照明（如图1所示）中，使用了几种形状的滤光片。通过宽开的明场电容器的斜光或外光通过一种或多种颜色的环形（环形）滤光器（如图1中的红色滤光片和图2中的环形滤光片）。如图2中的几种组合所示，中心光线穿过另一个点状过滤器配合到环形过滤器的圆形开口中。该目的在全孔径下使用。在这种特殊情况下，样本将呈现绿色背景上的红色（图2（a）），蓝色背景上的黄色（图2（b））或红色背景上的绿色（图2（c）） 。
莱茵贝格过滤器被制备或制造为透明环形彩色环形，中心具有圆形开口，如图3所示。在商业版本的这些过滤器的商业版本中，附带的一组透明色点或“中心过滤器”制成紧贴在环形圈的开口中（图4）。通过增加将过滤器与外圈分开的窄黑色环的尺寸（图4（ac）），可以改变中央过滤器的直径（以调制背景照明强度）。有效组合包括：红环，紫中心过滤器; 黄橙色环，蓝色中央过滤器等。通过使用带有彩色中央滤光片的透明无色环产生其他视觉有效的图像。例如，带有红色中央滤镜的透明环将在红色背景上产生白色或无色图像。
实际上，外圈“变成”样品的颜色，中心过滤器“变成”背景的颜色。外圈也可分为交替的颜色部分，如图5所示。扇形过滤器在经验性织物，水晶面，硅藻和木材部分的研究中特别有效，其中长度尺寸尺寸显示在对比色。
多年来，一些显微镜制造商出售Rheinberg过滤器，其色彩凝胶（类似于柯达Wratten过滤器），其预切合以适合其显微镜的子级过滤器环。环形圈的外径为31-35毫米，中心过滤器通常具有15-18毫米的直径，用于10x-0.25NA物镜。这些过滤器也可以在实验室中使用柯达Wratten过滤器或彩色过滤器在科学供应商和光学部件分配器上广泛使用。明胶过滤器可以通过用适当直径的软木钻孔机切割中心过滤器来制备，环形环可以通过在滤纸上仔细画一个圆圈并用一把剪刀切割来制备。在我们的实验室，支持机械师已经构建了一个黄铜模具，其切割与我们的Rheinberg过滤器支架直径相同的环形过滤器圈。该模具可以快速地从乙酸盐或明胶彩色过滤器片中非常光滑的圆圈印上。环形过滤器的中心可以用与制备中央过滤器相同的软木塞进行切割。
有时，当这些都由非常薄的乙酸盐或明胶过滤器制成时，难以为环形过滤器内的中央过滤器提供坚固的外壳。在这种情况下，您只需将带有双面胶带的环形过滤器中心的中央过滤器胶带，但请注意，中央过滤器和环形过滤器颜色将会增加，因此对中央过滤器使用非常暗的过滤器。一般来说，中央过滤器应该比环形过滤器要暗得多，以使样品的高光与背景形成鲜明的对比。我们经常将两个或三个相同颜色的中央滤光片放置在堆叠中，以调节透过中央滤光片的光线透过率。莱茵伯格过滤器也可以使用玻璃过滤器制造，当分层聚光镜装配有这些过滤器的外壳时，这非常方便。在这种情况下，最好将中央过滤器带到玻璃过滤器的中心。对于有兴趣制作自己的过滤器的人们， 在我们的参考书目中列出的Needham实用显微镜中将会有更全面的讨论。
我们使用图6中的鹿蜱（Ixodes dammini）的显微照片比较了明场，暗场和莱茵伯格照明技术。第一幅显微照片（a）说明了明场照明下的蜱。形象缺乏对比，很多细节难以解决。图6（b）显示了在暗场照明下相同的刻度，其中存在更多的对比度和细节，并且刻度上的许多特征是明显的。使用蓝色中心滤光片和黄色环形环的蜱的莱茵伯格照明（图6（c））（参见图2（b））导致增加的对比度效果，类似于暗场，但具有令人愉快的蓝色背景。在这个例子中，暗场和莱茵伯格照明技术比明场产生了非常好的显微照相。
在20世纪30年代后期，卡尔蔡司制造了一种特殊的聚光镜，即Mikropolychromar，旨在生产美丽的莱茵贝格图像。这种聚光镜长时间不生产，现在实际上是无法获得的，但是它由一个平静的聚光镜组成，在该聚光镜下有三个独立控制的隔膜。最外面的隔膜控制了场的直径，两个较小的隔膜控制了通过中心盘的光。各种颜色的环形透明环是套装的一部分。伴随着这些是一组透明的玻璃中心盘，其整齐地装配在环形圈的中心开口中。这位巧妙的聚光镜已被其中一位作者（阿布拉莫维茨）用于以各种放大倍数产生醒目的显微照片，
莱茵伯格照明适用于2x至100x物镜。然而，为了清楚地分离内部和外部颜色，应该在中央过滤器周围放置不透明的金属或纸圈。例如，对于10x物镜，不透明环的外径可以为15-18毫米，对于60倍油浸物镜，外径可以是22毫米。使用图4所示的中央滤波器来实验使用莱茵伯格照明实现最佳效果是个好主意。
为了研究纤维，原生动物，纺织品，昆虫，木材部分，水晶或其他未染色的低对比度对象，显微镜学家应考虑将Rheinberg照明添加到对比技术库中。可以查看和拍摄标本，产生视觉增强的图像，以及美观。
作者的最后一个注意事项：强烈建议显微镜制造商和/或独立配件制造商生产用于显微镜学家的Rheinberg电容器和滤光片。必要的组件将非常便宜地生产，并将极大地帮助显微学家为Rheinberg照明设置他们的显微镜。
