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特别是在荧光显微镜中，激发光是敌对友。一方面，非常欢迎通过荧光染料的特定光波长进行能量丰富的激发，从而产生明亮的正荧光染料信号。另一方面，由穿过光学元件表面的激发光的反射引起的“噪声”需要极小以产生黑色背景。这种关系称为“信噪比”，与光学区分荧光阳性细胞和阴性细胞高度相关。
该系统的症结在于，您向系统引入的激发光（能量）越多，光学元件上出现的反射就越多，从而导致“噪声”和“明亮”（而不是“深暗”）背景增加。这使得荧光阳性和阴性细胞之间的区分非常复杂。防止此类“噪音”的最佳解决方案是避免激发光与观察光束路径的光学元件接触。
三光束原理正是这样做的。它由两个用于立体观察的平行光束路径和一个专门用于荧光照明光的单独的第三光束路径组成。此原理的好处是观察光束路径没有任何直接激发光。与使用相同光束路径进行观察和照明系统（例如，使用带有二向色滤光片的荧光激发块来分离激发光和发射光的系统）相比，三光束原理具有明显更好的信噪比。
而且，所有三个光束路径的变焦都是同步的。照明光仅在体视显微镜的视场上聚集。通过增加放大倍数，激发光被束缚得更多，并且单位面积的激发光（能量）数量增加。
另一个优点是，三个光路被设计为彼此非常接近。三个所需的荧光滤光片（一个用于激发，两个用于发射）安装在一个小的，易于更换的滑块中。由于其体积小，在三光束原理体视显微镜设置中最多可以使用四个滤光片。
概述：
1.耦合光导
2.光谱（全光谱）
3.激发滤光片
4.激发光
5.缩放系统，包括2个观察和1个发射光束路径
6.共同的主要物镜
7.荧光染料标记的探针
8.反射光
9.反射滤镜
10.三目观察筒
11.目镜
12.摄像头
总而言之，三光束原理是一种非常有效的系统，可以用激发光照亮样品，并以理想的信噪比观察产生的荧光。结果是明亮的荧光信号被深黑色背景包围。
