
在明场的反射光显微镜,适当使用图1中所示的两个可变膜片,孔径光阑(更接近光源)及视场光阑(靠近试样),使得能够使用的非常理想的柯勒照明。
这些膜片是在透射光它们各自的位置的相反,孔径光阑现在更靠近光源。 这样的照明提供了明亮的光线均匀地分散在整个视聚焦标本领域的平面。科勒照明提供利用物镜的具有良好的对比度和分辨率一致的数值孔径的最大份额无眩光的光。
要注意的是很重要的,在这些反射光的系统中,物镜具有双重功能:在向下作为正确对准的匹配良好校正的聚光镜的方法; 的方式向上作为突出朝向目镜的图像承载光的物镜的习惯性作用的成象物镜。 在透射光的系统,改变物镜需要在聚光镜的数值孔径的调整,以匹配新的物镜。 然而,在反射光,物镜和聚光器数值孔径同时与新的物镜发生变化。 共轭面是相似的透射光所描述,与物镜的后焦面和光阑光圈开口内所形成的光源的图像。 这用于减少在反射光显微术建立科勒照明条件的复杂性。
(除了提供分散均匀照明)科勒照明的功能是确保该物镜将能提供优良的分辨率和即使光的源是线圈灯丝灯良好的对比度。 孔径光阑控制光的撞击从每个方位检体中在明完全锥形反射光的角度。 物镜的数值孔径决定了可以被“捕获”,因为它是从检体的反射光的角度。 在其他因素相同,物镜的分辨率数值孔径越高越好,即更好的物镜是能够明确分开小细节紧贴在一起。 系统的垂直照明包含孔径光圈,以使物镜本身的背面没有被遮挡。
在柯勒照明,该系统被安排(图2),使得灯的线圈灯丝的图像是在孔径光阑的平面被聚焦; 它也是在聚焦在物镜的后焦平面。 假设有在照明器的光路中,当一个目镜被除去没有磨砂滤波器,灯丝的图像可以在物镜的后可以看到。 在大多数系统中,灯壳外有一组中螺钉(图3),它使您可以通过在南北和东西方向移动灯丝中心灯丝。 另外,孔径光阑的闭合或开口是在物镜的后焦平面观察到的,如上所述。
视场光阑是共轭(预聚焦)的聚焦检体,在目镜的固定膜片的平面的中间像平面,以及眼睛的视网膜上。
反射光显微术是越来越大的兴趣,特别是在考虑到其增加效用在荧光显微镜 。 迅速发展的半导体产业也导致增加使用反射光显微镜,它仍然是经典的应用,如金相,岩相学矿石和材料的研究非常有用的。
在实践中,样品首先聚焦用中等放大倍数的物镜,通常是10倍,和预聚焦视场光阑的开口被关闭,直到其处于视场的周边可见的。 如果该场光阑不居中,在垂直照射的定心螺钉用来移动一个部分封闭的光圈开口进入该领域的中心。 然后隔膜被打开,直到它刚刚从视图或通过在显微摄影光罩拍框划定的区域消失。 接着,将灯丝居中和聚焦(如果这尚未在工厂完成),并且孔径光阑被设定为最佳样品的对比度和图像质量。 这些步骤进行详细在下面的部分中讨论。
关于反射光显微镜的调整
科勒照明
目镜视场光阑
选择具有高程度的反射率,以使光的过程中的初始科勒照明配置步骤反射回物镜的量的样品。 一个理想的选择是在高反射硅集成电路,高度抛光的金属的截面,或一个光滑的金属薄膜。 检体应该具有某种程度的细节或纹理的,可用于寻找试样的焦平面。
放置在台上的反射试样并激活光源,这通常是相似于图3中示出的一个位于灯壳体钨 - 卤素灯泡旋转物镜转换到位置中功率物镜,如10倍,面向检体。 如果灯泡是否工作正常,光约3毫米的直径小的圆应该由物镜投射到样品的表面上。
一边看物镜和标本,用粗调焦旋钮提高阶段,直到它一对夫妇在物镜的前镜头下方毫米。 要非常小心,不要开车标本进入物镜前透镜。 接着,同时通过目镜观察标本,慢慢降低与载物台(起初)粗,然后微调旋钮,直到试样细节清晰聚焦。 如果焦点错过,符合物镜镜头前和标本之间略显不足的距离重新开始。 在许多情况下是比较容易找到,如果在尝试建立焦点检体移动的正确的聚焦。 无论是通过旋转的圆周360度的载物台,或使用机械载物台旋钮标本翻译中的视场来回做到这一点。
调整瞳距双目显微镜,一旦标本是大家关注的焦点。 屈光度调整在每个目镜也应该在这个时候进行。
许多偏振和微分干涉对比(DIC)显微镜配备有圆形刻度,围绕显微镜的光轴旋转完整的360度阶段。 这些显微镜通常配有个别调整(通过在管口固定螺钉),用于每一个物镜,以允许进行物镜的光轴同心与显微镜的光轴。 这是继续之前做出这样的调整是一个好主意。
下一步骤是调整视场光阑,它是可变光阑最接近显微镜的前面,如图4有时隔膜被标记为“F”,或直接在照明器壳体“ 现场 ”示出。 使用杠杆的调整,关闭视场光阑,直到你开始看到在视场的叶子。继续关闭隔膜的地步杆停止,只有一小开口是在目镜可见的。 检体和隔膜的叶子都应该锐聚焦,这通常是在工厂制造,因为大多数现代反射光显微镜没有配备,以允许视场光阑的轴向位置的调整(它不能被聚焦)的设置。 这是因为物镜的服务也正在聚光镜,所以关键的焦平面在出厂时,尽量减少显微镜对准误差预设的双重角色。 在大多数情况下,会出现在焦点,并在各物镜的视场光阑的中心之间的细微差别,但这种波动小,通常可以忽略不计。
一组定心旋钮的位置靠近场光阑允许用户到中心视场光阑在视场的垂直照明的外壳上。 使用这些旋钮居中视场光阑的图像,然后慢慢打开光圈叶片直至隔膜图像仅仅是在视野之外。 如果显微摄影是首要的考虑因素,视场光阑只应宽打开足以使在胶片帧(刻入显微摄影光罩)中规定的区域是可见的。 改变物镜不要求所述视场光阑的大小设置的调整,因为新的物镜也将作为聚光镜和关系将保持不变。 这很容易通过闭合场光阑到预先确定的大小相对于显微摄影或测量标线片验证。 改变物镜后,在视场的图像的大小将改变,但场光阑和掩模版的大小关系不会。
长丝对齐和光圈调整
正如在透射光科勒照明中,(“聚光镜”)孔在反射光光圈的调整是在控制标本对比度,减少衍射和眩光工件,并产生最好的图像质量的关键。 灯丝的形象应该是在重点和完全填充孔径光阑,类似与透射光的情况。
第一步是到中心和聚焦的灯丝。 一些现代的反射光显微镜(尤其是高端研究模型)都配备在外壳的预中心钨 - 卤素灯,它也配有一个聚光透镜和扩散屏幕。 有这些系统没有调整,但许多老年人落射照明系统具有必须居中灯,并提供用于此物镜的调整机构。 第一步是(如果可能)以除去玻璃扩散过滤器,在视场均匀地分布的照明。 接下来,使用调整旋钮(见图3),而在物镜后焦平面观察共轭图像居中灯丝。 这是在类似于对的方式进行的透射光显微镜 ,其中所述目镜被除去,在聚光镜光圈和灯丝图象是在物镜的后焦平面通过眼睛管观看。
当目镜从眼睛管中取出,灯丝的图像(锐聚焦)应在物镜的后焦平面可见,具有部分封闭的孔径光阑一起。 这一观察是通过使用相望远镜容易,一个伯特兰透镜(通常在偏振光显微镜中发现的附件)或通过端盖与在中心的销孔。 后者可以从用于装运过程中保护显微镜的内部目镜插头制成。 如果毛玻璃漫射屏尚未(或不能)中除去,均匀照明光磁盘应出现代替灯丝线圈。 如果灯丝不居中,“热点”将出现在光磁盘上,它可以通过调整在灯箱(图3)的螺钉来补救。 不断增量调整,直到照明均匀在整个光磁盘。
最后一步是调整孔径光阑,它通常由字母“A”或在垂直照明的外观的单词“ 光圈 ”识别的开口。 在一个透射光显微镜 ,聚光镜孔径光阑必须在每个不同的数值孔径的一个新的物镜被插入光路中时重新调整。 这是由于这样的事实,即物镜和聚光镜是单独的实体,并改变物镜的数值孔径不影响聚光镜。 为了补偿,聚光镜孔径光阑必须被打开或关闭以提供该物镜的数值孔径相匹配的光的照明锥体。 然而,在反射光显微术的物镜还充当聚光镜(如以上所讨论,同时提供照明和成像光通路),并且当选择一个新的物镜的数值孔径相应的改变。
确定孔径光阑的正确设置是获得那些无衍射文物图像最重要的,拥有足够的对比度,并且是最高的质量。 通常情况下,这会导致从一个折衷其中没有引入错误的工件由于折射和衍射最大化图像对比度之间达成妥协。 如上所述,光阑必须与在透射光显微术的每一个物镜的变化复位。 然而,在反射光显微镜,物镜和数值孔径与增量同步“聚光镜”的转变和一个设置可以选用孔径光阑。 此设置是通常介于60和95%的开放,但会从试样不同而不同标本和将在很大程度上依赖于试样的反射率。 高反光的样本将需要一个较小的光圈以减少眩光,提高对比度,但这是根据具体情况逐案进行最好。 最好的程序是先打开光圈设置为最宽,再慢慢将其关闭,同时查看样品,以优化对比度。 在显微摄影,它往往是明智的,“支架”的一组显微照片,每一个稍微不同的孔径大小。
上述明列出的技术的反射光显微术也适用于配备为交叉偏振,荧光和微分干涉对比(DIC)显微镜。 事实上,显微镜可以调整柯勒照明,而在任何这些模式,并且经常对比增强可以在不重新调整显微镜照明的必要性互换。